Menu

Научный календарь Июль 2018

В чем различие между процедурами лизиса и окрашивания лейкоцитов в каналах WDF и WPC?

Лизирующий реагент канала WPC воздействует на липиды мембран сильнее. Инкубация с поверхностно-активным веществом длительнее, во флуоресцентном реагенте выше концентрация полиметина, и в канале WPC происходит мечение ядерной ДНК.

Лизирующий реагент канала WDF воздействует на липиды мембран сильнее. Инкубация с поверхностно-активным веществом длительнее, во флуоресцентном реагенте выше концентрация полиметина, и в канале WDF происходит мечение ядерной ДНК.

Лизирующий реагент канала WPC воздействует на липиды мембран сильнее. Инкубация с поверхностно-активным веществом длительнее, во флуоресцентном реагенте ниже концентрация полиметина, и в канале WPC происходит мечение РНК в цитоплазме.

Лизирующий реагент канала WDF воздействует на липиды мембран сильнее. Инкубация с поверхностно-активным веществом короче, во флуоресцентном реагенте выше концентрация полиметина, и в канале WDF происходит мечение ядерной ДНК.

Congratulations!

That's the correct answer!

Sorry! That´s not completely correct!

Please try again

Sorry! That's not the correct answer!

Please try again

Notice

Please select at least one answer

Научные основы

Сочетание каналов WDF и WPC для анализа методом флуоресцентной проточной цитометрии в одном анализаторе позволяет нам обнаруживать реактивные и злокачественные клетки с высокой чувствительностью и специфичностью. Это возможно благодаря различиям в функциональности разных типов лейкоцитов.
В канале для дифференциального подсчета лейкоцитов (WDF) мечение флуорохромом зависит от состава мембран и содержимого цитоплазмы лейкоцитов. Активированные или незрелые клетки отличаются от нереактивных и зрелых клеток по составу липидной мембраны. Уникальное сочетание реагентов (для лизиса и мечения) и времени инкубации позволяет разделять разные клеточные популяции. Сначала лизирующий реагент образует поры в клеточных мембранах, при этом степень повреждения мембраны зависит от липидного состава, который, в свою очередь, зависит от типа клетки (степени зрелости) и ее состояния (активации). Затем флуорохромная метка связывается главным образом с РНК в цитоплазме. Интенсивность получающегося флуоресцентного сигнала зависит от степени перфорации мембраны (липидного состава) и общего количества РНК в цитоплазме. Информация о составе мембраны и цитоплазматической РНК (флуоресценция), объеме клетки (прямое рассеяние) и внутриклеточной структуре (боковое рассеяние) анализируется по патентованным алгоритмам, позволяющим обнаруживать реактивные, незрелые и патологические клетки в образце крови с высокой чувствительностью.

Лизирующий реагент WPC-канала сильнее воздействует на липиды мембраны за счет другого поверхностно-активного вещества и более длительной инкубации по сравнению с WDF-каналом. Кроме того, во флуоресцентном реагенте выше концентрация полиметина, таким образом, метка связывается с ядерной ДНК
. Примером того, каким образом функциональность клетки или состояние активации влияют на липидный состав мембраны, является присутствие так называемых «липидных плотов». Липидные плоты — это богатые холестерином и гликосфинголипидами микродомены в плазматических мембранах клеток, играющие важную роль в направленной миграции белков и клеточной сигнализации. Липидные плоты более упорядочены и плотно упакованы, чем окружающий мембранный бислой, однако свободно плавают в этом бислое. В клетках, более активных во внеклеточных взаимодействиях (например, злокачественных и активированных зрелых клетках), описано повышенное количество липидных плотов по сравнению с покоящимися зрелыми и незрелыми клетками (2-3).

Большее изменение проницаемости некоторых клеточных типов, например аномальных лимфоцитов, ведет к потере цитоплазмы и уменьшению размеров клеток (сигнал прямого рассеяния). Таким образом, тогда как WDF-канал позволяет судить главным образом о цитоплазматической активности, WPC-канал обнаруживает аномальные клетки по составу их мембран, ведущему к различиям в размере (сморщивание некоторых клеточных типов) и большей доступности содержащейся в них ДНК (т. е. более интенсивному мечению).

За счет сочетания обоих каналов — и соответствующих наборов реагентов и условий реакции — оптимизируется чувствительность и специфичность обнаружения реактивных и злокачественных клеток.

Литература

1.    Kawauchi S et al. (2014): Comparison of the Leukocyte Differentiation Scattergrams Between the XN-Series and the XE-Series of Hematology Analyzers. Sysmex Journal International Vol.24 No.1.

2.    Tuosto L et al. (2001): Organization of plasma membrane functional rafts upon T cell activation. Eur J Immunol. 31(2): 345 – 9.

3.    Li YC et al. (2006): Elevated Levels of Cholesterol-Rich Lipid Rafts in Cancer Cells Are Correlated with Apoptosis Sensitivity Induced by Cholesterol-Depleting Agents. Am J Pathol. 168(4): 1107 – 18.

4.    Kawauchi S et al. (2013): The Position of Normal Leukocytes on the Scattergram of the Newly Developed Abnormal Cell-detection Channel of the XN-Series Multi-parameter Automated Hematology Analyzers. Sysmex Journal International Vol.23 No.1.

Copyright © Sysmex Europe GmbH. All rights reserved.
Настройте параметры cookie-файлов

Мы используем куки (cookies, куки-файлы) для того, чтобы обеспечить Вам оптимальное использование нашего веб-сайта и улучшить нашу коммуникацию с Вами. Мы принимаем во внимание Ваш выбор и используем только те данные, на которые Вы выдали нам Ваше согласие.

* может привести к ограничениям в отношении содержания сайта и эффекта его использования
Подробнее о cookie-файлах
Необходимые куки
Эти куки помогают пользоваться нашим веб-сайтом за счет того, что они обеспечивают такие базовые функции как навигацию по сайту и доступ к безопасным разделам нашего сайта. Наш веб-сайт не может работать надлежащим образом без этих куки.
Куки для статистики
Эти куки помогают нам понять, как пользователи взаимодействуют с нашим веб-сайтом, за счет сбора информации на анонимной основе. Благодаря этой информации мы в состоянии непрерывно совершенствовать предлагаемые нами продукты и услуги.
Маркетинговые куки
Они используются для того, чтобы следовать за посетителями на веб-сайтах. Цель заключается в том, чтобы показывать рекламные объявления, которые относятся к кругу интересов и привлекают внимание отдельных пользователей, представляя за счет этого ценность для издателей и третьих сторон, занимающихся рекламной деятельностью.